該模型通過(guò)埋植雌激素，進(jìn)而建立了皮膚型狼瘡動(dòng)物模型，主要是檢測(cè)其dsDNA，腎臟變化，結(jié)合皮膚癥狀變化，來(lái)確定狼瘡皮膚病模型的建立。目前國(guó)際上尚欠缺類似模型，創(chuàng)新點(diǎn)在于該模型可快速建立模型，屬于誘導(dǎo)性狼瘡皮膚病模型，為研究狼瘡皮膚病發(fā)病機(jī)制提供了工具。目前國(guó)際無(wú)報(bào)道。

無(wú)安全性問(wèn)題。

二花臉×沙子嶺F2近交群體，患病個(gè)體為雙側(cè)外耳缺失伴發(fā)外耳道閉鎖，顳部CT顯示為雙側(cè)外耳道閉鎖、中耳結(jié)構(gòu)發(fā)育不良；進(jìn)一步的基因檢測(cè)為HOXA1純合突變。HOXA1基因純合突變的豬動(dòng)物模型，復(fù)合人類雙側(cè)小耳畸形畸形特征，為其進(jìn)一步在小耳畸形病理機(jī)制中的應(yīng)用提供基礎(chǔ)。

動(dòng)物模型查體

與正常個(gè)體相比，患病個(gè)體表現(xiàn)為：外耳明顯變小甚至完全缺失，見(jiàn)于雙側(cè)耳；外耳道完全閉鎖、少數(shù)僅僅存留一個(gè)瘺管樣結(jié)構(gòu)；身材矮小；呼吸急促；幾乎不主動(dòng)吃奶，人工喂養(yǎng)時(shí)也不能正常進(jìn)食；呆滯；平衡感差；出生后兩周內(nèi)死亡。

為了進(jìn)一步了解患病仔豬的各器官組織的發(fā)育情況，我們選擇了3頭患病個(gè)體進(jìn)行解剖觀察。結(jié)果顯示患病個(gè)體的各器官組織無(wú)明顯發(fā)育異常。沿著外耳道閉鎖的小孔剪開(kāi)患病個(gè)體的面部表皮和肌肉組織后，可見(jiàn)外耳道缺失；呈現(xiàn)為瘺管樣小孔向里延伸形成發(fā)育不良的狹窄外耳道，底部閉鎖未見(jiàn)鼓膜。

圖 2 患病仔豬耳部解剖圖

注：患病個(gè)體的外耳閉鎖為一個(gè)小孔，如1所示。剪開(kāi)皮膚組織，可見(jiàn)有些患病個(gè)體具有狹窄的外耳道，如2和3所示；有些患病個(gè)體的外耳道呈游離狀態(tài)，如4所示。5為正常的外耳道。

2. CT檢測(cè)

為了明確患病個(gè)體的中耳及內(nèi)耳情況，我們選擇了1頭正常個(gè)體和它的1頭全同胞雙側(cè)耳朵缺失的患病個(gè)體，進(jìn)行128層螺旋CT（Definition AS128，西門子，德國(guó)）頭部掃描。掃描結(jié)果顯示：患病個(gè)體雙側(cè)外耳道閉鎖消失。中耳發(fā)育畸形。內(nèi)耳未見(jiàn)明顯異常。

圖 3 全同胞正常和患病個(gè)體的頭部螺旋CT

注： 左側(cè)為正常個(gè)體，具有正常的外耳道(EAM)和乳突(MP), 圖中的標(biāo)尺線為5mm；右側(cè)為患病個(gè)體，無(wú)外耳道（EAM）和乳突(MP)，圖中的標(biāo)尺線為5mm。

3. HOXA1基因突變檢測(cè)

突變位于HOXA1基因CDS區(qū)的第451個(gè)堿基處，由G突變?yōu)門C，即c.451G>TC，患病個(gè)體和兩頭F0個(gè)體的sanger測(cè)序峰圖如圖所示。ORF分析表明此缺失插入突變?cè)斐闪薍OXA1蛋白翻譯移框，導(dǎo)致第151位的丙氨酸A突變?yōu)榱涟彼酟，從第151位氨基酸開(kāi)始往后的所有氨基酸序列都發(fā)生改變，還形成了一個(gè)新的終止密碼子TAA，使HOXA1蛋白的翻譯提前終止，編碼的氨基酸由336個(gè)減少為177個(gè)。功能分析表明突變蛋白缺少了HOX基因家族唯一的功能結(jié)構(gòu)域homeobox。

圖4 c.451G>TC的測(cè)序峰圖及突變蛋白示意圖

以二花臉公豬和沙子嶺母豬為祖代個(gè)體，構(gòu)建近交群體。HOXA1基因突變篩查：由于HOXA1基因編碼區(qū)的c.451G>TC突變導(dǎo)致。

二花臉×沙子嶺F2近交群體：此群體由1頭二花臉公豬和1頭沙子嶺母豬雜交，選取全同胞的1頭F1公豬和1頭F1母豬，互交六胎次，生產(chǎn)F2個(gè)體。

小耳畸形的病因目前還不完全明確，環(huán)境和遺傳因素是目前小耳畸形病因研究的重點(diǎn)。小耳畸形主要涉及胚胎發(fā)育期間第一和第二鰓弓的異常，主要表型涉及外耳發(fā)育異常。外耳的耳廓是由第一和第二鰓弓的逐漸融合形成的，在發(fā)育過(guò)程中第一和第二鰓弓之間是相互作用，兩弓之間的凹槽加深，形成外耳道。

小耳畸形主要是指外耳的先天發(fā)育性結(jié)構(gòu)異常，其嚴(yán)重程度主要表現(xiàn)為從輕度結(jié)構(gòu)異常到完全性耳廓缺失，并且可伴有外耳道狹窄和外耳道閉鎖等一系列先天性外耳異常，輕者耳廓略小于正常， 畸形嚴(yán)重者耳廓全部消失， 絕大多數(shù)患者僅遺留花生狀或貝殼狀的殘耳組織。同時(shí)一些小耳畸形患者也常合并顱面部畸形，中耳及半側(cè)顏面骨及軟組織發(fā)育不良等。

HOX基因家族是具有homeobox結(jié)構(gòu)域的典型家族，該結(jié)構(gòu)域由3個(gè)螺旋結(jié)構(gòu)組成。Homeobox結(jié)構(gòu)域位于HOX基因的C末端，homeobox結(jié)構(gòu)域的螺旋3可以嵌在特異結(jié)合DNA的大溝里，發(fā)揮轉(zhuǎn)錄因子的活性。HOXA1在小鼠和人類中都有了相關(guān)研究：Osamu等發(fā)現(xiàn)HOXA1突變純合子的小鼠在出生或出生后不久即死亡，且小鼠的外耳和中耳中均存在缺陷，后腦的特定核心區(qū)及中樞神經(jīng)也表現(xiàn)異常。Gavalas等發(fā)現(xiàn)HOXA1/HOXB1雙突變可導(dǎo)致小鼠的外耳消失。HOXA1小鼠突變體的表型與人類的BSAS綜合癥和ABDS綜合癥的表型有相似的地方。BSAS患者的小耳畸形的伴隨率為20%左右，患者還表現(xiàn)有眼睛水平凝視障礙和智力發(fā)育遲緩等問(wèn)題。