該模型采用了CRISPR/Cas9技術，創(chuàng)新性地結合了人類遺傳學與動物基因編輯技術，首次在小鼠上重構了與人類疾病類似的遺傳模式，在Tbx6基因上同時引入無效突變和promotor區(qū)域的亞效等位基因，并將二者結合，形成復合雜合突變并獲得相應的脊柱畸形表型。該模型是國際上首創(chuàng)的復合雜合突變脊柱畸形表型，對于解釋先天性脊柱側凸的分子機制和發(fā)病過程具有極高的研究討論價值。

該基因編輯小鼠將在屏障隔離環(huán)境（北京協(xié)和醫(yī)院實驗動物中心）內(nèi)進行繁育、飼養(yǎng)及相關實驗，其監(jiān)督管理措施由動物中心負責。屏障隔離期間將保持清潔，保證其具有SPF級別清潔度，減少感染及發(fā)病幾率。嚴格實驗室管理，防止小鼠外泄，實驗設計時將禁止其與野生型小鼠交配，保證編輯基因組序列不向自然界流通。上述措施將保證該動物模型的生物安全性，避免其影響生態(tài)環(huán)境。

1. 動物癥狀觀察

動物在損傷后1個月前后肢可觀察到共濟失調和跛行，繼而出現(xiàn)上肢關節(jié)功能障礙和抓握精細功能受損。

2.MRI影像學評估

MRI可見壓迫側脊髓形態(tài)改變，面積減少，灰白質萎縮，損傷中心損害較為嚴重并向頭尾側延伸。

3.電生理改變

脊髓壓迫后可出現(xiàn)不同的SEP變化，波形出現(xiàn)明顯改變，可表現(xiàn)為潛伏期延長和波幅降低。

4.病理改變

脊髓壓迫后三個月，HE染色可見脊髓外觀明顯扭曲，神經(jīng)元數(shù)量隨萎縮而減少、組織結構疏松。組織內(nèi)仍可見少量的出血，中央管擴張，另LFB染色可見壓迫區(qū)軸突明顯脫髓鞘改變。

6-8周齡SD大鼠。

1.脊髓壓迫材料的制備

本研究采用吸水膨脹性聚合物脫水吡喃半乳糖基為壓迫材料，材料能吸水溶脹卻又不溶解于水, 且具有良好的組織相容性。聚合物涂有緩釋膜，以控制組織周圍組織的間質液吸收，在24小時內(nèi)達到最大膨脹，并在6個月內(nèi)保持最大體積。試驗中干燥狀態(tài)的薄片被切割成細條狀, 環(huán)氧乙烷消毒后分裝備用。

2.動物模型制作

采用3%戊巴比妥鈉60mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，后俯臥位固定于腦立體定位儀。暴露頸背部, 在C3至C7水平剃毛備皮, 手術行無菌操作。顯露C3至C7椎板, 切除椎板間黃韌帶, 暴露硬脊膜。模型組將薄片聚合物置于大鼠C5-C6的椎板與硬脊膜之間。對照組的硬脊膜暴露及游離操作同模型組, 但不放置壓迫材料。整個手術操作過程動作輕柔, 并注意觀察大鼠的反應以及變化, 盡量避免損傷硬脊膜造成腦脊液漏, 以及避免脊髓急性損傷, 逐層止血縫合。術后均給予青霉素局部滴入預防感染。兩組大鼠術后放置于37℃條件下單籠飼養(yǎng)。如果出現(xiàn)排尿功能障礙, 即實行膀胱部按摩以幫助即實行膀胱部按摩以幫助大鼠排尿, 2次/天直到大鼠恢復自行排尿功能為止。

3.模型分析指標

（1） 行為學觀察

監(jiān)測大鼠爬行時下肢及軀干運動及協(xié)調情況

（2） 影像學評估

術后三個月進行MRI評估

（3） 電生理評估

分別采用SEP和MEP進行神經(jīng)電生理評估

（4） 組織學觀察

脊髓壓迫后三個月，取材進行石蠟切片HE染色觀察

脊髓型頸椎病是由于椎間盤突出、椎體后緣骨刺、黃韌帶肥厚或鈣化、椎管狹窄等頸椎椎體退化或相鄰軟組織的退變造成脊髓受到壓迫，加之長期保持不良姿勢等原因，使壓迫加重導致脊髓受壓或脊髓缺血，繼而出現(xiàn)脊髓的功能障礙。

臨床表現(xiàn)因病變脊髓被侵襲的程度、部位和范圍而異。感覺障礙多不規(guī)律，手臂的麻木多見，但客觀上淺痛覺障礙與病變所支配皮節(jié)不一定對應，深感覺少有受累者，可有胸或腹束帶感，此時常伴有腹壁反射增強。

上肢通常多以下運動神經(jīng)元通路損害為主，手笨拙，無力，表現(xiàn)為寫字、系鞋帶紐扣、用筷子等精細動作困難，隨病情發(fā)展可有手內(nèi)在肌萎縮，可出現(xiàn)上位其他上肢肌力減退。Hoffmann征(霍夫曼征)多顯示陽性，可有反向橈反射，即敲擊肱橈肌腹或肱二頭肌腱致手指快速屈曲，與Hoffmann征陽性意義相同，或出現(xiàn)更早。少數(shù)高位脊髓病變可有肌張力增高，腱反射亢進等上運動神經(jīng)元損害表現(xiàn)。

下肢多為上運動神經(jīng)元通路異常，表現(xiàn)為肌張力不同程度的增高和肌力減損，膝反射和跟腱反射活躍、亢進，出現(xiàn)踝陣攣、髕陣攣、Babinski征呈陽性。肌張力增高，腱反射亢進導致走路不穩(wěn)，尤其快走易跌倒、步態(tài)蹣跚、可出現(xiàn)痙攣步態(tài)。

脊髓型頸椎病較少引起排尿排便困難及括約肌功能障礙。